本说明书适用于“人B型脑钠肽（BNP）酶联免疫分析试剂盒”，旨在为用户提供准确、规范的操作流程及注意事项，确保检测结果的科学性与可靠性。请在使用前仔细阅读本说明，并严格按照操作步骤执行。
一、产品简介
本试剂盒采用双抗体夹心法原理，用于定量检测人血清或血浆样本中的B型脑钠肽（Brain Natriuretic Peptide, BNP）含量。BNP是一种由心室肌细胞分泌的多肽激素，在心脏功能异常时释放增加，是评估心力衰竭的重要生物标志物之一。
二、适用范围
本试剂盒适用于临床实验室对人血清或血浆中BNP浓度的体外定量检测，辅助诊断和监测心力衰竭等心血管疾病。
三、试剂组成
本试剂盒包含以下主要成分（具体组分以实际包装为准）：
- 微孔板：包被有特异性抗BNP单克隆抗体
- 标准品：含不同浓度的BNP标准溶液
- 酶标二抗：标记辣根过氧化物酶（HRP）的抗BNP多克隆抗体
- 底物液：TMB显色剂
- 终止液：终止反应并稳定显色
- 洗涤液：浓缩型，使用前需按比例稀释
- 样本稀释液：用于样本处理
四、检测原理
本方法基于双抗体夹心ELISA技术。首先将BNP抗原固定在微孔板上，加入待测样本后，BNP与固相抗体结合；随后加入酶标二抗，形成“抗原-抗体-酶标抗体”复合物；最后加入底物显色，通过测定吸光度值（OD450nm）计算BNP浓度。
五、操作步骤
1. 准备工作
- 所有试剂在使用前应恢复至室温（约25℃）
- 稀释洗涤液：按照说明书要求用去离子水或蒸馏水进行稀释
- 样本处理：血清或血浆样本应避免溶血、脂血，必要时可离心后取上清液使用
2. 加样
- 按照实验设计，将标准品、质控品及样本分别加入对应的微孔中
- 每孔加入量建议为100 μL，避免气泡产生
3. 孵育
- 将微孔板置于37℃恒温箱中孵育30分钟
- 孵育结束后，轻轻拍打板架以去除残留液体
4. 洗板
- 用洗板机或手动方式洗板5次，每次充分冲洗并吸干残留液体
5. 加入酶标二抗
- 每孔加入100 μL酶标二抗，37℃孵育30分钟
6. 再次洗板
- 同上一步骤洗板5次
7. 显色
- 每孔加入100 μL底物液，避光孵育15–20分钟，直至出现明显蓝色
8. 终止反应
- 每孔加入50 μL终止液，终止显色反应
9. 测定
- 使用酶标仪在450 nm波长下测定各孔吸光度值（OD值）
六、结果计算
- 绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线
- 根据样本OD值，从标准曲线上查得对应BNP浓度
- 对于超出线性范围的样本，需适当稀释后再行检测
七、注意事项
- 所有操作应在洁净环境中进行，避免交叉污染
- 试剂开瓶后应尽快使用，避免长时间暴露于空气中
- 不同批次试剂不可混用，以免影响检测结果
- 检测过程中应严格控制温度和时间，确保实验一致性
- 若出现异常数据，应重复实验或检查试剂是否失效
八、储存条件
- 未开封试剂应保存于2–8℃，避免阳光直射
- 已开封试剂应根据说明书要求妥善保存，避免反复冻融
九、有效期
本试剂盒自生产日期起有效期限为12个月，具体以包装标签标注为准。
十、安全提示
- 本试剂盒仅供体外诊断使用，不得用于人体直接注射
- 实验过程中应佩戴手套、口罩等防护用品，避免接触皮肤或吸入有害物质
- 废液应按实验室废弃物处理规定进行处置
如在使用过程中遇到任何问题，请联系厂家技术支持部门，我们将竭诚为您服务。
